2 樣品對(duì)
色譜柱的損害因素
雜質(zhì)堵塞:樣品中的微粒同樣會(huì)使柱子堵塞,樣品也應(yīng)進(jìn)行過(guò)濾處理。
樣品組分的不可逆吸附:通常被吸附的組分有蛋白質(zhì)、醣等,可以采取加裝保護(hù)柱,或使用適應(yīng)的溶劑反沖來(lái)處理。常用溶劑有四氫呋喃（適用于溶解有機(jī)高聚物和工業(yè)樣品中的焦油）、高濃度的脲或鹽酸胍溶液（使蛋白質(zhì)改性而洗脫）、高離子強(qiáng)度的磷酸鹽緩沖液（pH=7,適合反相柱和離子交換柱,可除去蛋白質(zhì)和醣等）。
樣品組分與固定相反應(yīng):這種反應(yīng)對(duì)NH2柱的影響較嚴(yán)重,NH2易和酐、酮形成希夫（Schiff）縮合而減少活性點(diǎn),使保留時(shí)間縮短,因此羰基化合物樣品和流動(dòng)相（如丙酮、乙酸乙酯等）不宜使用NH2柱。
活性點(diǎn)被覆蓋:由于固定相吸附樣品中的組成或雜質(zhì)而使活性點(diǎn)被覆蓋,在柱壓升高的同時(shí)保留時(shí)間減少,將樣品過(guò)濾或使用萃取分離柱（對(duì)大分子有機(jī)物如蛋白質(zhì)、白細(xì)胞等）效果較好。
3、色譜柱固定相的化學(xué)變化
色譜柱固定相分解、活性基團(tuán)變性以及鍵合相基團(tuán)脫落會(huì)使保留時(shí)間顯著變化。
3.1 鍵合相基團(tuán)脫落
絕大多數(shù)鍵合相都是通過(guò)硅氧硅鍵（Si-O-Si）連接在硅基質(zhì)上,形成帶有機(jī)基團(tuán)的固定相Si-O-Si-R（R為 G18H37、C8H17、CnH2n+1）。硅氧硅鍵可在水溶液中水解而斷裂,使鍵合相基團(tuán)脫落,對(duì)C2和NH2柱鍵合相基團(tuán)脫落不可忽視。為減少或防止基團(tuán)脫落,可增加流動(dòng)相的有機(jī)溶劑量,降低離子強(qiáng)度和pH值,對(duì)基團(tuán)已脫落的固定相,可用合適的硅烷試劑再生。
3.2 固定相分解或活性基團(tuán)變性
例如氰基柱的保留時(shí)間顯著縮短,但鍵合相中C、H、N的百分含量并無(wú)大變化,證明未發(fā)生—CN水解成-COOH反應(yīng),而是形成了衍生物。在硅上增加烷基可減少水解。
4、液相色譜柱的保養(yǎng)
色譜柱在使用一段時(shí)間后,常遇到柱子受污染,柱效下降的問(wèn)題,采用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)色譜加以保護(hù)和再生,能夠延長(zhǎng)
色譜柱的使用壽命。
